Extraction d’ARN à partir de Listeria monocytogenes prélevée sur des macrophages murines infectés

Prenez un tube avec du papier filtre contenant Listeria monocytogenes. Ces bactéries sont prélevées à partir de macrophages murins infectés.

Ajoutez un tampon contenant des inhibiteurs de RNase pour empêcher la dégradation de l’ARN, puis faites un vortex sur le tube à plusieurs angles pour déloger la bactérie.

Centrifugez et transférez la suspension dans un tube contenant un mélange phénol-chloroforme-détergent.

Ils ferment et incubent à température élevée pour perturber les membranes bactériennes, inactiver les protéines et lyser les bactéries, libérant ainsi des composants intracellulaires.

Centrifugeuse pour séparer la phase aqueuse riche en ARN des autres composants.

Collectez l’ARN et transférez-le dans un tube contenant de l’acétate de sodium et de l’éthanol.

Vortex, puis incuber à basse température.

L’acétate de sodium neutralise la charge négative de l’ARN, tandis que l’éthanol et le froid favorisent la précipitation de l’ARN.

Centrifugeuse pour pelleter l’ARN.

Retirez le surnageant et lavez la pellete avec de l’éthanol froid.

Centrifugez à nouveau, retirez le surnageant, séchez à l’air libre, et ajoutez de l’eau sans RNase.

Stockez l’ARN pour une analyse plus approfondie.

Dégelez les