Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:18 min • March 31st, 2026
Commencez par une plaque de culture contenant des colonies isolées d’une bactérie du sol.
Prélever et inoculer une colonie dans une fiole de culture déflectrice contenant un milieu nutritif.
Incubez la culture avec le secouement.
La fiole déflectrice possède des crêtes internes qui augmentent la turbulence lors de la secouage, favorisant l’aération.
Ce processus assure une distribution uniforme de l’oxygène et empêche l’agglomération cellulaire et la sédimentation, permettant une dispersion uniforme des nutriments.
Les bactéries prolifèrent rapidement, formant une suspension dense avec des cellules présentant des caractéristiques physiologiques uniformes.
À intervalles réguliers, prélever un échantillon dans une cuvette.
À l’aide d’un spectrophotomètre, faites passer la lumière à travers l’échantillon. La quantité de lumière transmise est mesurée pour quantifier la croissance bactérienne, appelée densité optique ou OD.
Sélectionnez des cultures bactériennes en phase exponentielle à stationnaire précoce, car les cellules à ce stade sont très actives métaboliquement et donc les plus susceptibles à une infection efficace par bactériophages.
Les cellules d’arthrobacter sont cultivées à partir de colonies striées sur une plaque agar LB, incubées à 30 degrés Celsius pendant deux à trois jours.
Utilisez une boucle stérile pour choisir une colonie et ajoutez-la à 50 millilitres de bouillon LB dans un flasque de culture défêleur. Incubez la fiole dans un incubateur secouant à 225 tr/min à 30 degrés Celsius pendant environ 24 heures afin d’obtenir des cellules de phase exponentielle ou stationnaires précoces pour des expériences d’infection par les phages.
Surveillez de près l’état de croissance bactérienne afin d’empêcher les cellules d’entrer dans l’état de croissance stationnaire moyen à tardif. Le ODidéal 600 pour l’isolation des phages est compris entre 0,5 et 0,7.