Visualisation des communautés bactériennes intracellulaires dans une vessie de souris infectée

JoVE Encyclopedia of Experiments

Microbiologie

0 vues • 2:06 min • March 31st, 2026

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Commencez par une vessie de souris immobilisée et disséquée, pré-infectée par l’E. coli uropathogène exprimant β-galactosidase, placée dans une plaque multi-puits recouverte de silicone.

La lumière de la vessie est orientée vers le haut, exposant les cellules épithéliales qui contiennent des communautés bactériennes intracellulaires, ou CCI.

Lavez la vessie avec un tampon pour éliminer les débris et les bactéries non attachées.

Ensuite, ajoutez un fixateur et incubez pour préserver les structures cellulaires et bactériennes.

Retirez le fixateur et lavez-le avec un tampon.

Ensuite, lavez-le avec un tampon contenant un détergent pour perméabiliser les membranes cellulaires et bactériennes.

Retirez le tampon, puis ajoutez une solution de X-gal, un substrat de β-galactosidase, complétée par des réactifs redox, et incubez.

Les réactifs X-gal et redox pénètrent dans la bactérie. β-galactosidase fende X-gal, produisant un intermédiaire incolore qui est oxydé par des réactifs redox pour former un précipité bleu.

Au microscope disséqueur, les points bleus dans la vessie confirment les CCI, indiquant une infection urinaire.

Pour l’énumération IBC, après avoir prélevé la vessie, placez-la dans un puits recouvert de silicone d’une plaque à 6 puits avec du PBS et utilisez des ciseaux pour la couper en deux.

À l’aide de petites goupilles métalliques placées le long des bords les plus extérieurs, écartez doucement la vessie de façon à ce que la lumière soit orientée vers le haut et que la quantité maximale d’urothélium soit exposée. Après avoir effectué la coloration LacZ comme indiqué dans le protocole textuel, observez les IBC, qui apparaissent comme des points bleus sous un microscope disséquant.

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Dernière mise à jour : 15 août 2026