Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:06 min • March 31st, 2026
Commencez par une vessie de souris immobilisée et disséquée, pré-infectée par l’E. coli uropathogène exprimant β-galactosidase, placée dans une plaque multi-puits recouverte de silicone.
La lumière de la vessie est orientée vers le haut, exposant les cellules épithéliales qui contiennent des communautés bactériennes intracellulaires, ou CCI.
Lavez la vessie avec un tampon pour éliminer les débris et les bactéries non attachées.
Ensuite, ajoutez un fixateur et incubez pour préserver les structures cellulaires et bactériennes.
Retirez le fixateur et lavez-le avec un tampon.
Ensuite, lavez-le avec un tampon contenant un détergent pour perméabiliser les membranes cellulaires et bactériennes.
Retirez le tampon, puis ajoutez une solution de X-gal, un substrat de β-galactosidase, complétée par des réactifs redox, et incubez.
Les réactifs X-gal et redox pénètrent dans la bactérie. β-galactosidase fende X-gal, produisant un intermédiaire incolore qui est oxydé par des réactifs redox pour former un précipité bleu.
Au microscope disséqueur, les points bleus dans la vessie confirment les CCI, indiquant une infection urinaire.
Pour l’énumération IBC, après avoir prélevé la vessie, placez-la dans un puit
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