JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologie
0 vues • 2:40 min • March 31st, 2026
Commencez par une souris anesthésiée avec un couvercle de boîte de Petri placé sous son abdomen pour maintenir le dos horizontal.
La souris présente une brûlure sur le dos qui a été infectée par Acinetobacter baumannii, un agent bactérien Gram négatif.
Les bactéries sont génétiquement modifiées pour porter un opéron bioluminescente.
Placez la souris dans une chambre d’imagerie par bioluminescence maintenue à une température optimale et commencez l’imagerie.
Au site d’infection, les gènes luxA et luxB de l’opéron de bioluminescence codent pour l’enzyme luciférase. Les gènes luxCDE codent des enzymes qui synthétisent le substrat de la luciférase.
La luciférase catalyse l’oxydation du substrat et produit de la lumière visible, rendant les bactéries luminescentes.
Le signal de bioluminescence indique la présence de bactéries métaboliquement actives au site de la plaie.
À l’aide d’un logiciel d’imagerie, quantifiez l’intensité du signal de bioluminescence pour estimer la charge bactérienne viable.
Immédiatement après l’inoculation, réalisez l’imagerie par bioluminescence en lançant le logiciel d’imagerie en direct. Dans le panneau de configuration, cliquez sur Initialiser. Ensuite, attendez que la couleur de la boîte de température devienne verte, indiquant que la température de l’étape dans la chambre de l’échantillon a atteint 37 degrés Celsius.
Placez la souris anesthésiée sur la scène chaude dans la chambre à échantillons, avec les brûlures infectées directement sous la caméra. Ensuite, dans le panneau de configuration, cochez à côté de « Luminescence ».
Ensuite, sélectionnez « Exposition automatique » afin que le temps d’exposition pour l’imagerie soit optimisé par le logiciel d’imagerie en direct en fonction de l’intensité de la bioluminescence. Sélectionnez « C » dans la liste déroulante « Champ de vision ». Sélectionnez l’option de balayage des médiums pour que le logiciel détermine la distance focale.
Ensuite, cochez à côté de superposition. Maintenant, cliquez sur « Acquérir » pour capturer l’image. Ensuite, dans la case « Modifier l’étiquette de l’image », cliquez sur ok. Une « Fenêtre d’image » et une « Palette de péage » apparaîtront. Définissez les paramètres Auto-ROI pour la sélection automatique.