Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:47 min • March 31st, 2026
Commencez par une lame de microscope perforée et placez une biopsie tissulaire circulaire sur la zone perforée.
Ensuite, placez un joint en caoutchouc dessus.
Retournez et insérez cet ensemble dans la partie inférieure du cadre de la chambre de perfusion métallique.
Alignez le cadre supérieur avec le bas et fixez-les.
Utilisez un pied à coulisse pour confirmer la hauteur uniforme de la chambre.
La chambre est reliée à une pompe, qui elle-même est reliée à un réservoir contenant des bactéries suspendues dans un tampon.
Commencez la perfusion de la suspension bactérienne dans la chambre.
La perforation centrale de la culasse permet l’entrée de la suspension bactérienne dans l’ensemble.
Cela permet l’interaction entre les bactéries et la surface tissulaire, favorisant l’adhésion et la colonisation.
Cette configuration génère un modèle in vitro qui imite la colonisation bactérienne in vivo sur le tissu.
Pour commencer le protocole, placez une biopsie tissulaire préalablement préparée de 10 millimètres de diamètre, avec la même épaisseur entre une lame de microscope et une perforation circulaire de huit millimètres, ainsi qu’un joint en caoutchouc avec la surface interne orientée vers le haut, pour entrer en contact avec la suspension bactérienne.
Concentrez-vous sur l’orientation du greffon de tissu lorsqu’il est placé dans le support. Assurez-vous que la surface interne du tissu est déjà exposée au sang vers le haut pour entrer en contact avec votre milieu expérimental.
Ensuite, insérez votre support avec le mouchoir dans la feuille de joint intégrée dans le cadre métallique inférieur de la chambre.
Fixez le cadre métallique supérieur avec la feuille de joint correspondante au fond de la chambre avec le support de mouchoir précédemment inséré. Ensuite, montez toute la chambre avec huit vis et des écrous à vis. Assurez-vous que la hauteur de la chambre reste toujours la même entre les greffons en utilisant un pied à coulisse ou une règle.
Ensuite, connectez la chambre de flux avec une pompe péristaltique. Ensuite, connectez le réservoir de liquide de 400 millilitres aux tubes. Perfusez les tissus avec des suspensions de 100 millilitres de dix vers les sept unités formant colonies marquées fluorescentement dans une solution saline tamponnée phosphate, avec la contrainte de trois dines par centimètre carré et un débit correspondant de quatre millilitres par minute pendant une heure en utilisant la pompe péristaltique et le réservoir bactérien. Recirculez en continu la suspension bactérienne de 100 millilitres en utilisant le même réservoir de collecte.