JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologie
0 vues • 2:15 min • March 31st, 2026
Commencez par des plants de maïs poussant dans des conditions contrôlées pour servir d’hôte.
Ensuite, prenons Agrobacterium tumefaciens, une bactérie pathogène des plantes.
Les bactéries modifiées portent un construct d’ADN-T codant pour un génome viral recombinant. Ce génome contient un fragment de gène inséré conçu pour faire taire un gène cible du maïs.
Injectez les bactéries juste au-dessus du ganglion coléoptilaire, le nœud le plus bas de la plante, jusqu’à ce que la suspension remplisse le coléoptile, assurant ainsi la délivrance aux tissus internes.
Au site d’injection, les bactéries transfèrent l’ADN-T porteur du génome viral dans les cellules de maïs, où il est transcrit en ARN viral qui se déplace dans le cytoplasme.
L’ARN se réplique et déclenche la production de protéines virales, formant de nouvelles particules virales qui se propagent systémiquement pour établir une infection.
L’ARN viral portant le fragment du gène désiré active la machinerie d’interférence ARN de la plante, dégradant certains ARNm spécifiques du maïs et faisant taire le gène cible.
Cela entraîne des altérations visibles des phénotypes régulés par le gène cible au fur et à mesure que les plantes infectées croissent, telles que la formation de lésions nécrotiques, confirmant ainsi la réussite du silence génique.
Utilisez des plants de maïs âgés de 4 à 7 jours pour injecter Agrobacterium. Assemblez la seringue et l’aiguille. Injectez doucement la suspension bactérienne à 2-3 millimètres au-dessus du ganglion coléoptilulaire jusqu’à ce qu’elle remplisse le coléoptile ou soit visible dans la volute, selon le stade de croissance des plantes.
Injectez tous les semis et changez la seringue et les aiguilles pour chaque construction. Confirmez l’infection phénotypique en observant les lésions provenant du silence des gènes témoins, du mimique de la lésion 22, ou de la phytoène désaturase sur les feuilles.