Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
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Commencez par des plaques de bioanalyse, l’une pré-colonisée sur le côté gauche de l’agar nutritique avec du Corynebacterium propinquum et l’autre contenant uniquement de l’agar nutritif.
Ensuite, prenez une plaque multi-puits contenant une suspension Staphylococcus pathogène.
Descendez un tampon d’inoculation dans les puits, dont les extrémités plongent dans la culture Staphylococcus .
Faites tourner le tampon, puis soulevez-le et vérifiez que chaque pointe porte une gouttelette uniforme afin d’assurer une inoculation constante.
Alignez le tampon avec le côté droit de la plaque de biodosage, évitant ainsi le contact avec les colonies existantes.
Retirez le tampon, laissant des taches de Staphylococcus inoculum sur l’agar.
Répétez l’estampage sur la plaque d’agar seule pour obtenir une monoculture. Incubez les plaques à l’envers.
Dans la coculture, C. propinquum sécrète des sidérophores, de petites molécules qui absorbent le fer de l’agar, inhibant ainsi la croissance de Staphylococcus .
Après l’incubation, comparez la croissance de Staphylococcus dans la coculture et la monoculture.
Une inhibition significative dans la co-culture suggère une interaction entre les deux espèces.
Après six jours d’incubation de la plaque de bioessai, préparez des cultures nocturnes de l’organisme cible comme décrit précédemment. Préparez la plaque cible en remplissant chaque puits d’une plaque vide à 12 puits avec 1,8 millilitre de BHI et 200 microlitres de culture ciblée pendant la nuit. Placez un tampon d’inoculation stérile dans la plaque cible.
Faites doucement tourner les cultures autour des puits, afin de veiller à ce qu’elles ne contaminent pas les puits voisins. Soulevez le tampon d’inoculation et assurez-vous qu’il y ait une goutte de culture cible diluée sur chaque pointe de tampon. Placez le tampon d’inoculation sur une plaque de biotest non inoculée, et balancez doucement le tampon afin que la gouttelette de culture inocule chaque puits.
Une fois le timbre retiré, une goutte de culture devrait être visible dans les puits. Si aucun puits n’est inoculé avec le tampon d’inoculation, placez 3 microlitres de culture diluée pendant la nuit sur les puits à l’aide d’une pipette. Ensuite, inoculez les plaques de biotest comme décrit précédemment, mais alignez les pointes du tampon avec le côté droit de la plaque à 12 puits, afin de garantir que le tampon ne touche pas la colonie bactérienne existante. Retirez soigneusement le tampon et replacez-le dans la plaque cible.
Si l’agar s’est solidifié dans les puits de manière inégale, balancez doucement le tampon, mais faites attention à ne pas déplacer le tampon dans la croissance de l’organisme testé.
Répétez l’inoculation pour chaque plaque de biotest jusqu’à ce que toutes les plaques soient inoculées, puis incubez les plaques à l’envers à la température appropriée pendant sept jours.
Après une co-culture du test et de l’organisme cible pendant une semaine, évaluez les interactions sur la base d’une évaluation visuelle. Notez les puits avec la croissance de l’organisme cible qui présente une croissance indiscernable de la monoculture comme zéro. Notez les puits avec croissance diminuée comme un, et pas de croissance comme deux.