Imagerie par fluorescence de la colonisation bactérienne dans le tissu rénal de la souris

Commencez par un rein de souris infecté par des bactéries Gram-positives modifiées qui colonisent le tissu et forment des lésions.

Toutes les cellules bactériennes expriment la fluorescence rouge, tandis que les conditions spécifiques à chaque lésion de l’hôte permettent l’expression de protéines fluorescentes vertes dans des cellules spécifiques.

Traiter le rein avec un fixateur et incuber dans le noir pour préserver la structure tissulaire et perméabiliser partiellement les membranes cellulaires.

Enfoncez l’organe dans un milieu approprié, congelez-le, puis coupez-le en fines tranches de tissu.

Placez la tranche sur une lame en verre chargée pour l’adhérence.

Colorez le tissu avec un colorant nucléaire.

Le colorant pénètre les cellules de l’hôte et bactériennes et se lie à l’ADN.

Placez une gaine de couverture sur le tissu et observez la lame sous un microscope à fluorescence en utilisant des canaux d’imagerie spécifiques.

La coloration nucléaire délimite l’ADN hôte et bactérien.

Toutes les bactéries du tissu expriment la fluorescence rouge, tandis que l’expression de la fluorescence verte indique le site d’interaction hôte-pathogène.

À l’extrémité expérimentale appropriée, prélever le rei