Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:43 min • March 31st, 2026
Commencez par un rein de souris infecté par des bactéries Gram-positives modifiées qui colonisent le tissu et forment des lésions.
Toutes les cellules bactériennes expriment la fluorescence rouge, tandis que les conditions spécifiques à chaque lésion de l’hôte permettent l’expression de protéines fluorescentes vertes dans des cellules spécifiques.
Traiter le rein avec un fixateur et incuber dans le noir pour préserver la structure tissulaire et perméabiliser partiellement les membranes cellulaires.
Enfoncez l’organe dans un milieu approprié, congelez-le, puis coupez-le en fines tranches de tissu.
Placez la tranche sur une lame en verre chargée pour l’adhérence.
Colorez le tissu avec un colorant nucléaire.
Le colorant pénètre les cellules de l’hôte et bactériennes et se lie à l’ADN.
Placez une gaine de couverture sur le tissu et observez la lame sous un microscope à fluorescence en utilisant des canaux d’imagerie spécifiques.
La coloration nucléaire délimite l’ADN hôte et bactérien.
Toutes les bactéries du tissu expriment la fluorescence rouge, tandis que l’expression de la fluorescence verte indique le site d’interaction hôte-pathogène.
À l’extrémité expérimentale appropriée, prélever le rein, le cœur, le foie, les poumons et la rate dans des tubes de polypropylène de 15 millilitres contenant 10 % de formol tamponné pour une incubation de 24 à 48 heures dans l’obscurité à température ambiante, avec un léger secouement ou rotation.
À la fin de la fixation, plongez les organes dans un milieu de congélation tissulaire clair pour les stocker à moins 80 degrés Celsius. Utilisez un cryostat pour obtenir des sections de tissu de 10 micromètres d’épaisseur et séchez les sections sur des lames en verre pré-nettoyées et chargées pendant 20 minutes dans l’obscurité avant d’appliquer un support dur complété par DAPI. Ensuite, appliquez des caches et durcissez les lames à température ambiante toute la nuit avant de transférer les échantillons dans un stockage à long terme à 4 degrés Celsius.
Pour identifier les lésions dans les échantillons, placez une lame sur la scène d’un microscope confocal à balayage laser et utilisez un objectif approprié pour visualiser les cellules individuelles afin d’acquérir des images des lésions.