Détection par PCR des agents pathogènes d’origine alimentaire à partir d’échantillons enrichis de mouches

Placez les tubes de réaction en chaîne ou PCR de polymérase contenant des comprimés prêts pour la PCR spécifiques aux agents pathogènes alimentaires ciblés sur un support de tube PCR refroidi.

Chaque comprimé comprend des amorces spécifiques à la cible, de la polymérase ADN, des dNTP et un colorant fluorescent utilisé lors de la réaction PCR.

Ajoutez un lysat de mouche enrichi contenant une grande quantité d’ADN provenant de bactéries pathogènes pour former le mélange de réactions.

Scellez les tubes avec des bouchons optiques pour éviter l’évaporation.

Chargez les tubes PCR dans le thermocycleur et effectuez des séances PCR séparées en utilisant des programmes spécifiques à chaque pathogène cible.

Lors de la PCR, l’ADN se dénature, les amorces se lient à la séquence cible, et l’amplification produit de l’ADN double brin qui lie le colorant et émet de la fluorescence.

Des cycles répétés entraînent une amplification exponentielle de l’ADN et une fluorescence accrue.

L’instrument suit la fluorescence en temps réel pour détecter la présence des agents pathogènes ciblés d’origine alimentaire dans l’échantillon.

Pour commencer la détection par PCR, il faut d’abord refroidir un rack de tubes PCR sur un bloc de refroidissement. Ensuite, placez les tubes PCR correspondants contenant des comprimés prêts pour la PCR pour le pathogène alimentaire ciblé dans le porte-documents.

Retirez soigneusement les bouchons des tubes PCR à l’aide de l’outil de débouchage et jetez-les. Vérifiez que chaque tube contient un comprimé. Ensuite, transférez 50 microlitres de lysat dans les tubes PCR appropriés.

Fixez de nouveaux condensateurs optiques sur les tubes PCR à l’aide de l’outil de bouchage. Après avoir assemblé les réactions, chargez les tubes PCR dans le système de détection du cycleur PCR. Ensuite, exécutez le programme et consultez les résultats tels que décrits dans le protocole du fabricant.