JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologie
0 vues • 2:03 min • February 26th, 2026
Commencez par une rate de souris pré-infectée par des bactéries pathogènes.
Placez la rate dans une solution saline froide tamponnée de phosphate pour préserver la viabilité bactérienne.
À l’aide d’un homogénéisant, homogénéisez la rate pour la perturber mécaniquement et libérez les bactéries intracellulaires dans le tampon.
Cela génère une suspension bactérienne qui reflète la charge bactérienne totale dans la rate.
Effectuer des dilutions en série de l’homogénéat pour réduire la densité bactérienne dans la solution afin de déterminer avec précision le nombre de bactéries.
Ensuite, prenez une plaque d’agar nutritive divisée en deux sections.
Placez la même dilution bactérienne sur chaque section de la plaque d’agar pour générer des répliques.
Laissez sécher la plaque, puis inversez-la et incubez. Pendant l’incubation, les bactéries viables se multiplient et forment des colonies distinctes.
Comptez les colonies de chaque section de la plaque pour calculer les unités moyennes formant des colonies, ou UFC, qui représentent la charge bactérienne totale dans la rate pendant l’infection.
La rate dans un tube de 15 millilitres contenant deux millilitres de PBS. Ensuite, utilisez des homogénéisants individuels jetables par échantillon pour macérer les tissus sur la glace, suivis d’une dilution en série des boues tissulaires.
Placez les dilutions, en duplic, sur des côtés opposés d’une seule plaque TSA, et laissez les échantillons sécher brièvement. Ensuite, inversez les plaques et cultivez les échantillons dans un incubateur statique à 37 degrés Celsius toute la nuit, en faisant la moyenne des colonies bactériennes des deux côtés de la plaque et de chaque dilution le lendemain matin.