Évaluation des effets inhibiteurs sur la formation des pellicules chez Bacillus subtilis

Commencez par une culture de Bacillus subtilis, une bactérie du sol, cultivée dans un milieu riche en nutriments.

Centrifugez pour pelleter les bactéries, éliminez le surnageant, puis resuspendez le pellet dans un milieu chimiquement défini qui soutient la formation de biofilms.

Mesurez la densité optique de la culture pour déterminer la concentration bactérienne appropriée.

Ajouter la culture à des puits contenant un milieu défini pour le témoin et un milieu défini avec un inhibiteur pour le test.

Incubez dans des conditions statiques. Les bactéries migrent vers le haut et s’accumulent à l’interface air-liquide, où une disponibilité accrue en oxygène favorise la croissance bactérienne.

Dans le puits de contrôle, les bactéries à l’interface sécrètent des composants de la matrice extracellulaire et forment un biofilm flottant appelé pellicule, une couche protectrice favorisant la survie bactérienne.

Dans le puits testé, l’inhibiteur perturbe la synthèse de la matrice, entraînant la dispersion des populations bactériennes.

Ce test montre que les inhibiteurs bloquent la formation de biofilms, ce qui est une caractéristique clé de la pathogenèse bactérienne.

D’abord, sélectionnez une colonie individuelle appropriée et transférez-la dans 3 millilitres de bouillon LB. Placez cette culture de levain dans un incubateur secoué pendant 4 heures à 37 degrés Celsius. Après l’incubation, prenez 1,5 millilitre de culture de démarrage et centrifugez pendant quatre minutes.

Retirez soigneusement le surnageant, puis re-suspendez le pellet dans 1,5 millilitre de milieu MSgg. Pour faire croître des pellicules, préparez une plaque de culture cellulaire à 12 puits en ajoutant 3 millilitres de MSgg à chaque puits. À certains de ces puits, ajoutez MSgg avec un inhibiteur de petite molécule dans une plage de concentration, répartissant ainsi la localisation des différentes concentrations autour de la plaque, afin d’éviter les effets de bord.

Mesurez la densité optique à 600 nanomètres de la culture de démarrage resuspendue. La culture devrait être comprise entre 0,6 et 1. C’est crucial pour la robustesse du système.

Inoculez chaque puits de la plaque de culture avec 3 microlitres de la culture de démarrage resuspendue. Ensuite, incubez la plaque à 23 degrés Celsius pendant trois jours dans des conditions statiques. Ensuite, retirez la plaque de l’incubateur et observez les pellicules.