Imagerie confocale des biofilms bactériens induits par des filtrats de crachats chez des patients atteints de mucoviscidose kystique

Incubez un verre de couverture à chambre contenant des bactéries adhérées dans un milieu complété avec un filtrat de crachats dérivé du patient et uniquement dans le milieu.

Le filtrat de crachats contient des composants dérivés de l’hôte qui stimulent les voies de signalisation bactériennes, déclenchant la production de matrices et la formation de biofilms.

Une fois les biofilms formés, il faut éliminer le milieu contenant des bactéries flottantes libres et des composants résiduels dérivés de l’hôte.

Lavez-le avec un tampon pour éliminer les bactéries faiblement attachées.

Ajoutez un mélange colorant contenant des colorants fluorescents perméables à la membrane et imperméables, et incubez dans l’obscurité.

Le colorant perméable à la membrane traverse des membranes intactes, marquant à la fois les bactéries viables et non viables. En revanche, le colorant imperméable n’entre que dans les membranes endommagées, marquant sélectivement les bactéries non viables.

Après l’incubation, retirez la solution de coloration et lavez-la avec le tampon pour éliminer l’excès de colorant et réduire la fluorescence de fond.

Ajoutez un nouveau milieu et obtenez des images à l’aide de la microscopie confoca