Établissement d’un modèle murin de l’infection à Clostridium difficile

Commencez par une souris prétraitée avec des antibiotiques pour épuiser le microbiote intestinal.

Maintenez doucement la souris en position verticale pour allonger l’œsophage.

Ensuite, on prend une aiguille orale de gavage reliée à une seringue contenant un inoculum de spores dérivées de Clostridium difficile, un agent bactérien anaérobie.

Insérez l’aiguille de gavage par le côté de la bouche et faites-la avancer lentement dans l’œsophage.

Une fois l’aiguille atteinte au milieu de l’œsophage, administrez lentement l’inoculum et retirez doucement l’aiguille.

Les spores administrées traversent l’estomac jusqu’à l’intestin grêle, où les sels biliaires déclenchent la germination en bactéries végétatives C. difficile .

Ces bactéries migrent vers le côlon anaérobie, où l’épuisement du microbiote concurrent permet l’adhésion aux surfaces épithéliales, la prolifération et la formation de colonies.

Les bactéries colonisées libèrent des toxines qui perturbent les jonctions épithéliales et endommagent la barrière intestinale. Cette perturbation de la barrière favorise la translocation bactérienne dans les tissus plus profonds, établissant Clostridium difficile infection.

Dans une cagoule à flux laminaire, prenez une souris et immobilisez la tête en retenant doucement l’animal par la peau lâche du cou et du dos.

En utilisant l’index et en veillant à ce que l’animal ne vocalise pas ou ne montre aucun signe de détresse, immobiliser davantage la tête de l’animal et allonger l’œsophage. Maintenez la souris en position verticale et verticale et passez doucement l’aiguille de la bouche dans le côté de la bouche. Dirigez l’aiguille de gavage le long du palais et avancez lentement vers l’œsophage.

Une fois que l’aiguille est à peu près à mi-chemin dans l’œsophage, injectez 25 microlitres d’inoculum à spores puis retirez doucement l’aiguille. Remis l’animal dans sa cage et observe-le pour détecter tout signe de toux ou de détresse respiratoire pouvant indiquer une administration involontaire de la trachée.