Développement d’un modèle d’infection larvaire par poisson-zèbre utilisant le microgavage

Prenez une larve de poisson-zèbre anesthésiée dans le sillon d’une moisissure d’agarose. Sa tête est positionnée vers le haut à un angle pour permettre l’accès intestinal lors de l’injection.

Recouvrez-la d’agarose à faible fond, puis laissez-la solidifier et immobiliser la larve.

Prenez une aiguille de microinjection contenant des bactéries pathogènes en suspension dans une solution de colorant traceur.

Sous un stéréomicroscope, positionnez l’aiguille en angle et guidez l’aiguille à travers l’agarose jusqu’à la bouche larvaire.

Avancez-la à travers le tuyau alimentaire jusqu’à l’intestin.

Injectez la bactérie dans la lumière intestinale et confirmez l’administration à l’aide du colorant traceur. Cette méthode non invasive, appelée microgavage, imite la voie naturelle de l’infection.

Retire l’aiguille. Coupez l’agarose et transférez la larve dans un milieu frais.

Les bactéries se répliquent et libèrent des toxines qui endommagent l’épithélium intestinal, favorisant l’invasion bactérienne et la colonisation dans les tissus plus profonds.

Le modèle d’infection par le poisson-zèbre est prêt à être analysé.

Dans une plaque à 1,5 % d’agarose avec des rainures, placez une goutte d’agarose à faible fonte à 0,8 % sur les larves du poisson-zèbre pour la couvrir.

Ajustez doucement les larves avec la tête dressée à 45 degrés dans la rainure et les queues contre la paroi de la rainure. Faites délicatement passer l’aiguille à travers l’agarose, puis dans la bouche des larves de poisson-zèbre, puis par l’œsophage. Une fois la pointe de l’aiguille à l’intérieur du bulbe antérieur de l’intestin, appuyez sur la pédale d’injection pour libérer 0,5 à 1 nanolitre de culture bactérienne.

Remplissez la lumière de l’intestin. Ne laissez pas le déborder de l’œsophage ou de la cloaque. Retirez doucement l’aiguille de la bouche du poisson-zèbre. Après le gavage, sauvez les larves de poisson-zèbre infectées de l’agarose avec une pointe microchargeuse flexible en coupant d’abord l’agarose, puis en soulevant les larves.