JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologie
0 vues • 3:03 min • March 31st, 2026
Prenez une culture bactérienne capable d’infecter le tissu foliaire.
Grattez les colonies et suspendez-les dans une solution salée.
Mesurez la densité optique pour évaluer la concentration bactérienne, puis diluez jusqu’à la OD souhaitée.
Effectuer des dilutions en série pour atteindre la concentration finale de l’inocule.
Ajoutez un tensioactif pour réduire la tension superficielle et assurer une propagation uniforme des bactéries sur la feuille.
Transférez la suspension dans une boîte de Petri.
Ensuite, placez deux bâtons en bois sur le dessus d’un pot d’Arabidopsis .
Inversez la plante sur le plat, en plongeant les feuilles dans la suspension.
Placez l’installation dans une chambre à vide et appliquez une impulsion sous vide
Le vide appliqué retire l’air du tissu foliaire par des ouvertures naturelles.
Relâcher le vide restaure la pression atmosphérique, forçant les bactéries à pénétrer dans les feuilles.
Répétez les impulsions pour obtenir une infiltration maximale.
Enlève le pot. Ensuite, épongez l’excès d’inocule.
Les feuilles d’Arabidopsis infectées par des bactéries sont prêtes à être analysées en aval.
Écartez le stock de glycérol de la souche d’intérêt de Pseudomonas syringae de moins 80 degrés Celsius dans une plaque LB complétée avec les antibiotiques appropriés. Incubez la plaque à 28 degrés Celsius pendant 40 à 48 heures. Gratter la biomasse bactérienne et la remettre en suspension dans cinq millilitres de chlorure de magnésium à 10 millimolaires.
Mesurez la densité optique à 600 nanomètres et ajustez-la à 0,1 en ajoutant du chlorure de magnésium de 10 millimolaires. Effectuer des dilutions en série de chlorure de magnésium à 10 millimolaires pour obtenir une concentration finale en inocule de 5 fois 10 à la cinquième UFC par millilitre. Ensuite, préparez 200 millilitres d’inoculum pour les plants d’Arabidopsis et 50 millilitres pour les plants de haricots.
Avant l’inoculation, ajoutez le tensioactif Silwet L-77 à une concentration finale de 0,02 % pour l’inoculation des haricots et de 0,01 % pour l’Arabidopsis. Pour l’infiltration d’Arabidopsis , placez deux bâtonnets de bois formant un X au-dessus du pot et placez le pot face vers le bas au-dessus d’une boîte de Petri de 14 centimètres de diamètre contenant 200 millilitres d’inoculum. Pour l’inoculation des feuilles de haricot, insérez les plantes et la solution d’inocule dans une chambre à vide et introduisez la feuille dans un tube centrifuge conique de 50 millilitres contenant l’inoculum.
Donnez une impulsion de 500 millibars pendant 30 secondes pour infiltrer les feuilles. Égouttez l’excès de solution d’inocule avec une feuille de papier, puis ramenez les plantes dans leur chambre de croissance correspondante.