Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:43 min • March 31st, 2026
Commençons par les cellules épithéliales dans lesquelles l’expression de la protéine adaptatrice de l’interféron, un médiateur clé de l’immunité innée, a été réduite, rendant les cellules plus sensibles à l’infection par Brucella .
Remplacer le milieu par un milieu infectieux contenant Brucella abortus (protéine fluorescente verte) exprimant Brucella abortus, un pathogène intracellulaire facultatif, à la concentration désirée.
Centrifugez la plaque pour favoriser le contact entre les bactéries et les cellules hôtes, puis incubez pour permettre l’internalisation bactérienne.
Lavez les cellules avec un substrat contenant du sérum et traitez-les avec un antibiotique pour éliminer les bactéries extracellulaires.
Incubez davantage pour permettre à Brucella de se multiplier intracellulairement.
Laver les cellules avec un tampon et les fixer avec du paraformoldéhyde pour préserver les structures intracellulaires.
Rincez l’excès de fixateur. Ensuite, ajoutez un tampon complété de détergent pour perméabiliser les cellules.
Rincez la lessive résiduelle, puis ajoutez du DAPI pour tacher les noyaux, et effectuez un lavage final.
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