Surveillance de la colonisation bactérienne des racines d’Arabidopsis thaliana dans un système sans sol

Commencez par des semis d’Arabidopsis thaliana cultivés sur des supports en maille à faible densité qui flottent à la surface d’un milieu de croissance liquide dans un système sans terre.

Ces semis ont été pré-inoculés avec des bactéries qui colonisent la racine et forment un biofilm.

Tenez le plant et pincez doucement la tige sous les feuilles avec une pince.

Ensuite, soulevez le semis du maillage sans endommager la racine, préservant ainsi la structure racinaire colonisée.

Transférez le plant sur une plaque multi-puits contenant de l’eau double distillée.

Couvrez la plaque de feuille et soniez les échantillons à l’aide d’un sonateur multi-branches pour perturber le biofilm et déloger les bactéries de la surface racinaire.

Après la sonication, utilisez la suspension bactérienne sonique pour préparer des dilutions en série.

Placez les échantillons dilués sur des plaques d’agar et ajoutez des billes de verre pour répartir uniformément les bactéries.

Retirez les billes et incubez les plaques pour permettre aux bactéries viables de former des colonies.

La formation de colonies confirme la colonisation réussie des racines par les bactéries dans le système sans sol.

Après le rinçage, retirez les semis du maillage en plaçant délicatement des pinces stérilisées au feu sous les feuilles, du côté feuille du maillet. Pincez légèrement la tige et faites bouger les semis vers le haut et loin du maillage pour déloger la racine sans la casser. Pour éliminer les bactéries des racines des plantes, transférez les semis de chaque maille dans des puits individuels d’une plaque de sonnation de 24 puits contenant un millilitre d’eau double distillée.

Sonicez tous les échantillons à l’intérieur de la plaque en même temps, en utilisant un sonicateur multi-branches comme décrit dans le manuscrit. Pour quantifier les bactéries, effectuez des dilutions sérieuses de 10 fois des échantillons sonés dans un milieu de croissance bactérien. Étalez à l’aide de billes de verre stériles et incubez à la température optimale pour les bactéries jusqu’à ce que les colonies individuelles soient dénombrables.