Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:00 min • March 31st, 2026
Commençons par des cellules cyanobactériennes fixes, immobilisées et perméabilisées adhérées à une couche de revêtement.
Ces cellules cyanobactériennes expriment des protéines régulatrices de croissance à faible abondance.
Lors de l’imagerie à fluorescence haute résolution, les pigments sensibles à la lumière naturelle dans les cellules cyanobactériennes émettent une fluorescence de fond.
Cela réduit la qualité de l’image lors de la visualisation de ces protéines à faible abondance.
Pour minimiser cette fluorescence de fond, placez la couche contenant les cellules cyanobactériennes dans un plat colorant.
Ajoutez un tampon bloquant contenant des protéines sériques pour empêcher la liaison anticorps non spécifique lors du traitement en aval et un détergent pour maintenir la perméabilité cellulaire.
Placez la plaque de teinture sur de la glace et exposez les cellules à une lumière xénon intense.
La lumière à haute intensité initie le photoblanchiment, décomposant les pigments photosensibles, tandis que les protéines régulatrices de croissance à faible abondance restent intactes.
Les conditions froides minimisent les dommages causés par la chaleur et préservent l’intégrité cellulaire.
Ce processus permet une visualisation claire des protéines régulant la croissance à faible abondance via l’immunocoloration lors de la microscopie à fluorescence haute résolution.
Transférez la housse lavée sur le plat de teinture.
Ajoutez 50 microlitres de tampon de blocage en haut de la couche de protection. Placez toute la plaque de coloration sur de la glace puis déplacez-la sous la source lumineuse au xénon pour photoblanchiment pendant au moins 60 minutes. Après photoblanchiment et blocage, utilisez le bord d’un essuie-tout pour retirer le tampon de blocage.