Détection de la susceptibilité aux antibiotiques bactériens à l’aide d’un microscope à diffusion Raman stimulée

Commencez par des échantillons bactériens prétraités avec des concentrations croissantes d’un antibiotique qui élimine les bactéries sensibles.

Ajoutez un milieu de croissance contenant de l’oxyde de deutérium et la même concentration d’antibiotiques aux tubes correspondants.

Incubez les tubes sous des conditions de secouement.

L’oxyde de deutérium pénètre dans les cellules bactériennes, où le deutérium est incorporé dans les biomolécules nouvellement synthétisées, formant des liaisons carbone–deutérium.

Broyez les bactéries, jetez le surnageant et lavez.

Ajoutez un fixateur pour préserver la structure bactérienne.

Ajoutez de l’eau, centrifugeuse, et retirez le surnageant.

Résuspendez la bactérie et transférez la suspension sur un verre de couverture recouvert de poly-L-lysine, puis scellez-le.

Placez l’échantillon sur la scène d’un microscope Raman stimulé ou SRS précalibré. Ajoutez de l’eau et baissez l’objectif.

Acquérir des images de plusieurs champs pour évaluer la fréquence vibratoire carbone-deutérium.

À des concentrations plus élevées d’antibiotiques, le signal carbone-deutérium diminue, indiquant une viabilité bactérienne réduite.

Cela permet une évaluation rapide de la susceptibilit