Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:29 min • March 31st, 2026
Prenez une gouttelette d’un pathogène bactérien sur un film de paraffine.
Placez une larve de Drosophila dans la gouttelette bactérienne.
Au stéréomicroscope, utilisez une aiguille de tungstène pour piquer la larve et percer sa cuticule, la couche externe protectrice et l’épiderme sous-jacent.
Cela permet l’entrée bactérienne dans l’hémolymphe larvaire, le liquide circulatoire.
Transférez les larves infectées sur une assiette d’agar rainurée riche en nutriments contenant de la pâte de levure comme source alimentaire.
Les sillons facilitent la migration larvaire et préviennent la déshydratation.
Ajoutez la suspension bactérienne restante à la plaque et scellez-la avec un film de paraffine.
Incubez la plaque dans une chambre humide pour maintenir la viabilité larvaire.
À l’intérieur de l’hémolymphe larvaire, des cellules immunitaires appelées hémocytes détectent les bactéries et initient la phagocytose.
Alors que certaines bactéries sont éliminées après la fusion phagosome–lysosome, d’autres survivent en retardant la fusion ou en résistant au stress intracellulaire et se répliquent dans les hémocytes, conduisant à une infection intracellulaire prolongée.
Les Drosophila larvae infectées sont désormais prêtes pour des études d’interaction hôte-pathogène.
Placez la pâte de levure sur une plaque d’agar de jus de raisin. Faites une découpe fine dans l’agar où les larves peuvent migrer pour éviter le dessèchement.
Assemblez une aiguille en tungstène pointue de 0,001 millimètre avec des pinces de maintien à l’aide d’un film de paraffine. Pipettez 50 microlitres de C à haute titre, exprimant mCherry. Burnetii sur le film de paraffine sous le microscope stéréoscopique, et placer les larves dans la piscine de bactéries. Piquez les larves avec une aiguille au tungstène.
Transférez les larves sur une plaque d’agar. Transférez le milieu pathogène restant sur la plaque d’agar, puis scellez la plaque avec un film de paraffine. Gardez les larves sur l’assiette dans l’air humide jusqu’au moment souhaité après l’infection. Laisse le C. Burnetii a infecté les larves sur l’assiette pendant 24 heures.