Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:36 min • March 31st, 2026
Prenez une suspension d’une bactérie pathogène isolée sur une plante infectée.
Le génome bactérien contient une fusion transcriptionnelle, dans laquelle le promoteur d’un gène régulateur de la virulence favorise également l’expression d’un gène protéique fluorescent en aval, sans promoteur.
Lors de l’infection végétale, l’activation du promoteur déclenche la production des protéines régulatrices et fluorescentes.
La protéine régulatrice active les gènes de virulence, tandis que la fluorescence fournit une lecture mesurable de l’activation de la virulence.
Centrifugez les cellules, jetez le surnageant, puis resuspendez pour obtenir une suspension concentrée.
Placez une goutte sur une housse de couverture et posez un coussinet d’agarose pour disperser et immobiliser les cellules.
Capturez une image en champ clair pour identifier toutes les cellules bactériennes, puis une image de fluorescence pour détecter la fluorescence unicellulaire.
Fusionnez les deux pour visualiser les différences d’intensité de fluorescence, qui révèlent des sous-populations avec une expression génique de virulence élevée, faible ou nule.
Cette variation phénotypique reflète une stratégie adaptative qui améliore la survie bactérienne lors de la colonisation des plantes.
Pour une analyse monocellulaire, préparez une solution d’agarose à 1,5 % dans de l’eau distillée. Une fois fondues, ajoutez assez de volume pour remplir l’espace entre deux lames de microscopie posées côte à côte et placez une autre lames par-dessus. Laissez-les rouler 15 minutes et retirez soigneusement la culasse posée sur le dessus.
À l’aide d’une lame, découpez le tampon d’agarose en morceaux de 5 millimètres par 5 millimètres avant utilisation. Parallèlement, centrifugez 1 millilitre de la bactérie extraite de l’apoplaste. Retirez soigneusement le surnageant à l’aide d’une pipette et resuspendez le pellet dans 20 microlitres d’eau pour concentrer les cellules.
Placez une goutte de 2 microlitres des cellules concentrées sur une barbe de 0,17 millimètre et couvrez la goutte avec un morceau de tampon d’agarose. Visualisez la préparation bactérienne sous microscope confocal pour identifier les bactéries fluorescentes vertes à l’aide de lasers spécifiques. Identifiez toutes les bactéries à l’aide du champ clair et fusionnez les deux champs.