Extraction de l’ADN total des feuilles pour la détection d’une infection bactérienne

Commencez par de petits morceaux de tissu foliaire refroidi dans lesquels le phloème est infecté par un agent pathogène bactérien.

Placez les morceaux dans un mortier contenant de l’azote liquide pour inhiber l’activité des nucléases dégradant l’ADN.

Broyez pour perturber mécaniquement les cellules et libérer les composants intracellulaires.

Utilisez une spatule refroidie pour transférer la poudre, ajoutez un tampon de lyse, puis faites un vortex sur la suspension.

Incuber pour lyser les noyaux des plantes et les cellules bactériennes, libérer de l’ADN et de l’ARN tout en dénaturant les protéines.

Ajoutez de la RNase et incubez pour dégrader l’ARN.

Ajoutez un tampon de précipitation protéique aux protéines agrégées, puis centrifugez pour les séparer.

Transférez l’ADN végétal et bactérien contenant le surnageant à l’isopropanol pour précipiter l’ADN sous forme de filaments.

Centrifugeuse pour collecter l’ADN et jeter le surnageant.

Lavez-le avec de l’éthanol, puis centrifugeuse, et jetez le surnageant.

Faites sécher l’ADN à l’air, puis ajoutez un tampon de réhydratation et incubez pour le dissoudre.

Les échantillons d’ADN sont désormais prêts pour une détection en aval basée sur PCR.

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