Dissection de l'homme des éléments du corps vitré de l'analyse protéomique
23 janvier 2011
Cette vidéo montre une technique efficace pour différencier et disséquer les différentes structures de semi-transparente du corps humain vitreuse en post mortem yeux.
Le vitré est une matrice extracellulaire optiquement transparente qui remplit l'intérieur de l'œil. Il peut être divisé en plusieurs sous-structures, notamment l'hyaloïde antérieure située derrière le cristallin, la base du vitré au niveau de la rétine antérieure, le cortex vitréen formant une enveloppe élastique et le noyau vitréen situé au centre. Pour disséquer le vitré, nous devons d'abord retirer le segment antérieur.
Une lame très tranchante est utilisée pour inciser la cornée au niveau du limbe. Ensuite, des ciseaux cornéo-scléraux servent à couper la cornée juste en avant du limbe. L’iris est disséqué à l’aide de ciseaux courbes en le tirant depuis sa face.
Une pression douce sur le globe oculaire peut expulser le noyau. Pour retirer le noyau vitréen, utilisez une aiguille de calibre 23 sur une seringue de 5 cm³ et aspirez le vitré, principalement liquide. L'hyaloïde antérieur devient visible sous la forme d'une fine structure membraneuse transparente qui peut être saisie à l'aide d'une pince.
Il s'agit d'une structure élastique située juste derrière le cristallin. Le cercle intérieur est le ligament de Wieger. Des ciseaux de Van sont utilisés pour couper l'hyaloïde tandis que des pinces exercent une traction.
Le tissu latéral peut être transféré dans un tube afu et la manœuvre est répétée jusqu'à ce que tout le tissu ait été disséqué. Pour accéder aux sous-structures vitréennes restantes, il est nécessaire d'ouvrir l'œil à l'aide de ciseaux courbes de Westcott. Chaque lamelle est écartée à l’aide de forceps dans une boîte de Pétri.
Cette image montre l'anatomie de la base du vitré, un tissu mince et transparent qui chevauche laora serrata. Laora serrata constitue la ligne de démarcation entre le corps ciliaire en avant et la rétine en arrière. Contrairement aux autres parties du vitré, la base du vitré adhère fermement au corps ciliaire et à la rétine sous-jacents ; ainsi, une traction avec une pince soulève effectivement le tissu.
Pour isoler la base du vitré, nous retirons d'abord la pars plana à l'aide d'une pince et de ciseaux de Wescott. La pars plana est cette petite zone présentant des crêtes. Ensuite, pour isoler la base du vitré, couper deux à trois millimètres en arrière de l'aura avec les ciseaux de Wescott tout en stabilisant l'œil à l'aide de la pince, maintenir et exercer une traction sur la base du vitré à l'aide de la pince, puis effectuer des coupes successives avec les ciseaux de Wescott.
On observe un aspect en collier de perles lorsque la base du vitré est excisée, et l'on peut voir comment cette matrice extracellulaire pourrait compartimenter les protéines. Différentes techniques peuvent être utilisées pour disséquer l'enveloppe du vitré. Le contact avec une éponge de cellules WEX soulèvera le cortex.
Un bord du cortex peut être trouvé entre les feuillets, comme indiqué ici. Utilisez à nouveau la pince pour créer une traction et prenez les ciseaux de VanNess afin de couper séquentiellement le cortex vitréen. Le cortex peut également être soulevé à partir du disque, et des ciseaux de Westcott plus grands sont alors utilisés pour disséquer le cortex tandis qu'il est soigneusement détaché de la surface de la rétine.
Les échantillons peuvent ensuite être placés dans un micro et conservés pour une analyse protéomique ultérieure.
Aperçu
Cette vidéo montre une technique permettant de différencier et de disséquer les structures translucides du corps vitré humain dans des yeux post mortem. Le processus implique une dissection minutieuse afin de mettre au jour diverses sous-structures du vitré.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Neurosciences
- Ophtalmologie
- Histologie
Contexte
- Le vitré est une matrice extracellulaire optiquement transparente située dans l'œil.
- Il comprend plusieurs sous-structures, notamment l'hyaloïde antérieure et la base du vitré.
- La compréhension de l'anatomie du vitré est essentielle pour diverses études oculaires.
- Les techniques de dissection sont cruciales pour isoler ces structures à des fins d'analyse.
Objectif de l'étude
- Démontrer des techniques de dissection efficaces pour le corps vitré.
- Approfondir la compréhension de l'anatomie du vitré.
- Préparer des échantillons pour des analyses ultérieures.
Méthodes utilisées
- Retrait du segment antérieur à l’aide d’une lame extrêmement tranchante.
- Disséction de l’iris et du noyau vitré à l’aide de ciseaux et de pinces spécialisés.
- Coupe séquentielle de la base et du cortex du corps vitré à l’aide d’instruments de précision.
- Prélèvement d’échantillons destinés à une analyse protéomique.
Résultats principaux
- L'hyaloïde antérieur est identifié comme une membrane fine et transparente.
- La base du vitré est isolée et présente un aspect de chaîne de perles.
- Différentes techniques permettent efficacement de disséquer le cortex vitréen.
- Des échantillons sont préparés pour des études protéomiques futures.
Conclusions
- Les techniques présentées sont efficaces pour disséquer le corps vitré.
- La compréhension de l'anatomie du vitré est essentielle pour la recherche oculaire.
- Des méthodes de dissection appropriées sont cruciales pour l'intégrité de l'échantillon.
Questions fréquemment posées
Pertinence professionnelle pour l'industrie
La dissection précise et la compartimentalisation des sous-structures vitréennes humaines permettent un profilage protéomique essentiel à la compréhension des mécanismes des maladies oculaires touchant la rétine et les affections vitréorétiniennes. Ce flux opératoire facilite l'identification et la validation précoce de cibles thérapeutiques en révélant des signatures protéiques spécifiques au sein de compartiments distincts de la matrice extracellulaire. Cette approche renforce la fiabilité prédictive dans la recherche translationnelle et le tri des projets en découverte de médicaments ophtalmologiques.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Permet l'isolement de sous-structures vitréennes discrètes pour une interrogation protéomique fondée sur des hypothèses.
- Permet l'identification de candidats protéiques spécifiques à chaque compartiment impliqués dans les pathologies rétiniennes.
- Facilite la réduction des risques mécanistiques en précisant l'hétérogénéité moléculaire au sein de la matrice oculaire.
- Améliore la fiabilité prédictive pour le classement par ordre de priorité des cibles pertinentes aux maladies dans les filières ophtalmologiques.
Développement de tests et criblage
- Fournit des échantillons de tissus validés pour des dosages protéomiques quantitatifs en aval.
- Permet une préparation reproductible de matrices biologiques en vue de la normalisation des dosages.
- Facilite le développement de plateformes de criblage ciblant des profils protéiques compartimentés.
- Améliore la fiabilité de l'évaluation des composés en assurant l'intégrité et la spécificité des échantillons.
Recherche translationnelle et préclinique
- Aligne les découvertes protéomiques avec des biomarqueurs pertinents pour la maladie afin d'assurer une continuité translationnelle.
- Permet la progression ajustée au risque des cibles candidates vers la validation préclinique.
- Facilite les études mécanistiques reliant la composition moléculaire aux phénotypes de la maladie.
- Permet l'intégration transversale des équipes de recherche fondamentale et translationnelle.
Intégration du pipeline et du flux de travail
Cette méthode de dissection et de protéomique établit un lien entre la découverte précoce et la recherche translationnelle en permettant une analyse moléculaire spécifique aux compartiments du corps vitré humain.
- Biologie de la découverte : Soutient la vérification d'hypothèses et la clarification des voies biologiques par l'isolement de compartiments protéiques uniques.
- Criblage : Fournit des échantillons reproductibles et bien caractérisés pour des dosages protéomiques quantitatifs.
- Analytique : Fournit des profils protéiques distincts pour l'analyse comparative entre sous-structures du vitré.
- Recherche translationnelle : Relie les découvertes moléculaires aux mécanismes des maladies et au développement de biomarqueurs.
- Réutilisation en entreprise : Établit un protocole standardisé utilisable de manière répétée dans divers programmes de R&D ophtalmologiques.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Augmente la confiance prédictive et réduit l'ambiguïté mécanistique dans la validation des cibles.
- Valeur opérationnelle : Améliore la reproductibilité et la standardisation de la préparation des tissus pour les flux de travail protéomiques.
- Valeur stratégique : Éclaire les décisions d'avancement ou d'abandon et améliore l'efficacité du capital dans les portefeuilles de découverte ophtalmologique.
- Impact sur le portefeuille : Permet une priorisation ajustée au risque des cibles selon des preuves moléculaires spécifiques aux compartiments.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise en anatomie oculaire et en techniques de microdissection.
- Exige un accès à des instruments de dissection spécialisés et à une infrastructure d'analyse protéomique.
- Implique une standardisation rigoureuse entre les équipes pour une préparation reproductible des échantillons.
- Peut nécessiter des adaptations selon les espèces ou les modèles de maladie, en fonction des tissus disponibles.
- L'intégrité des échantillons et la spécificité des compartiments sont essentielles pour la validité analytique en aval.
