Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:22 min • August 31st, 2026
Commencez avec un flacon de culture contenant des cellules rénales embryonnaires humaines dans un milieu riche en nutriments.
Remplacer le milieu par du milieu frais contenant de la chloroquine afin d'améliorer la livraison du plasmide dans les cellules.
Prenez un mélange de plasmides codant pour les protéines de surface de la grippe, les protéines du core rétroviral et le génome rétroviral, ainsi que du phosphate de calcium. Incubez pour former des complexes ADN-phosphate de calcium.
Ajouter le mélange aux cellules et mélanger délicatement. Incuber pour permettre au complexe d'entrer dans les cellules par endocytose. La chloroquine favorise l'échappement endosomal de l'ADN plasmidique.
À l'intérieur de la cellule, l'ADN plasmidique induit l'expression de composants grippaux et rétroviraux.
Remplacer le milieu pour éliminer les complexes en excès.
Incuber pour permettre l'assemblage des composants viraux et leur bourgeonnement sous forme de pseudovirus, qui sont libérés dans le milieu de culture.
Récupérez le milieu contenant les pseudovirus et centrifugez-le pour former un culot de débris cellulaires.
Recueillir le surnageant contenant le pseudovirus et le conserver à basse température po
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