Préparation de cryosections rétiniennes de souris pour évaluer la perméabilité rétinienne aux virus adéno-associés

Prendre un œil prélevé sur un modèle murin présentant une barrière rétinienne altérée, préalablement injecté avec un virus adéno-associé portant le gène de la protéine fluorescente verte.

La barrière rétinienne compromise permet aux AAV de pénétrer dans les cellules photoréceptrices, où le génome viral est exprimé pour produire la GFP, rendant ainsi les cellules fluorescentes.

Disséquer l'œil pour enlever la cornée et le cristallin, en laissant la cupule oculaire intacte.

Immerse le fond d'œil dans une solution fixative pour préserver la structure de la rétine.

Transférez l'œil dans des solutions de cryoprotecteur de concentrations croissantes de manière séquentielle. Incubez ultérieurement dans la concentration finale afin d'empêcher la formation de cristaux de glace.

Incorporez la cupule oculaire dans un milieu cryogénique et congélez-la.

À l'aide d'un cryostat, découper l'œil en tranches fines.

Monter la section sur une lame. Ajouter un tampon contenant des détergents pour perméabiliser le tissu et permettre l'accès des anticorps lors de l'immunomarquage ultérieur.

Rincez la section. Traitez-la avec une solution de blocage pour éviter les interactions non spécifiques des anticorps lors