Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:24 min • August 31st, 2026
Commencez avec l'œil d'une souris transgénique préalablement injectée avec un virus adéno-associé (AAV) portant le gène d'intérêt qui code une protéine fluorescente.
La souris ne possède pas un gène essentiel au maintien de l'intégrité de la membrane limitante interne (ILM), une barrière qui sépare la rétine de la cavité vitrée.
La perte de ce gène imite une dégénérescence rétinienne, permettant au virus de pénétrer plus profondément dans les couches cellulaires de la rétine.
Les cellules rétiniennes infectées expriment le gène d'intérêt, produisant des protéines fluorescentes, ce qui leur permet de fluorescer.
Maintenant, disséquez l’œil et retirez la cornée et le cristallin.
Détacher soigneusement la rétine de l'épithélium pigmentaire de la rétine (RPE) et de la sclère, la couche externe de l'œil.
Immerger le tissu dans le fixateur.
Laver avec du tampon phosphate pour éliminer le fixateur résiduel.
Lorsqu'on les observe au microscope confocal, la fluorescence dans les cellules rétiniennes indique une pénétration virale réussie à travers la membrane limitante interne compromise.
Pour les montages plats de la rétine, faciliter la dissection en fixant les yeux énucléés dans du paraformaldéhy
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