Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
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Commencez avec des hépatocytes cultivés sur une plaque revêtue de collagène.
Introduire un complexe de réactif de transfection associé à deux plasmides : l'un portant un génome modifié du virus de l'hépatite B ou VHB, et l'autre codant pour les protéines structurales virales.
Incuber pour permettre l'entrée du plasmide. À l'intérieur de la cellule, les gènes viraux sont exprimés afin de produire des protéines structurales et un génome HBV modifié, qui s'assemblent pour former des particules de VHB recombinant.
Remplacer le milieu et incuber pour favoriser la production et la libération des particules virales.
Récupérez le milieu et centrifugez-le pour former un culot à partir des débris.
Recueillir le surnageant et le filtrer pour éliminer les débris résiduels.
Ensuite, ajouter du polyéthylène glycol et du chlorure de sodium pour précipiter les particules virales.
Centrifuger pour former un culot. Dissoudre le culot dans un tampon et centrifuger pour éliminer les débris. Ensuite, déposer le surnageant sur un coussin de saccharose.
Effectuer une ultracentrifugation pour faire sédimenter les particules virales à travers le coussin.
Éliminez le surnageant et resuspendez le culot dans le milieu
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