JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologie
0 vues • 2:29 min • August 31st, 2026
Prenez des larves de moustiques en début d'instar, qui sont sensibles à l'infection virale.
Transférez les larves dans un bécher contenant de l'eau déionisée.
Introduire un dénovirus recombinant, conçu pour coder un microARN qui supprime les gènes cibles des larves. Incuber.
Les larves absorbent le virus, qui atteint ensuite l'intestin.
Le virus ingéré traverse l'épithélium intestinal et se propage vers d'autres tissus.
Le virus pénètre dans les cellules larvaires par endocytose et libère son ADN dans le noyau.
L'ADN viral produit des microARN.
Dans le cytoplasme, ces microARN se lient au complexe d'interférence ARN.
Le complexe se lie et clive les ARNm larvaires cibles complémentaires, empêchant leur expression et entraînant un silençage génique.
Après l'incubation, laver les larves avec de l'eau désionisée pour éliminer les particules virales non ingérées.
Transférez les larves dans une nouvelle boîte avec de la nourriture pour récupération.
Les larves de moustiques infectées par le virus, avec le gène cible silencé, sont prêtes pour des applications en aval.
Laver trois fois 100 larves de premier stade de A. albopictus à l'aide d'eau déionisée. Ensuite, transférer les larves dans un bécher contenant 95 millilitres d'eau déionisée.
Ajouter cinq millilitres des stocks de rAaeDV, puis incuber les larves pendant 24 heures à 28 degrés Celsius. Pour réussir l'infection des larves, il est essentiel que celles-ci soient en contact avec les particules virales pendant 24 à 36 heures afin d'assurer des taux d'infection élevés. Après l'incubation, laver les larves trois fois avec de l'eau déionisée, puis les transférer à nouveau dans les boîtes. Nourrir les larves régulièrement.