Transfert de gènes dans des organoïdes intestinaux de souris à l'aide de vecteurs lentiviraux
Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:30 min • August 31st, 2026
Commencez avec des organoïdes intestinaux de souris qui ont été partiellement dissociés afin de faciliter la transduction lentivirale.
Prendre les vecteurs lentiviraux dans un milieu de transduction.
Le lentivirus porte un gène d'intérêt pour une intégration stable dans le génome de l'hôte.
Ajouter le lentivirus dans le puits.
Incuber le mélange pour permettre l'entrée virale.
L'ARN viral est rétrotranscrit en ADN et s'intègre dans le génome de l'hôte.
Ajouter un milieu pour organoïdes et transférer le mélange dans un tube.
Centrifuger pour éliminer les virus non liés.
Mélanger le culot dans une matrice de membrane basale.
Placer les organoïdes dans un puits et les laisser durcir.
La matrice forme un réseau qui piège les organoïdes et leur fournit un soutien structurel.
Ajouter du milieu pour organoïdes supplémenté avec des promoteurs de croissance afin de soutenir la prolifération des organoïdes.
Cela donne lieu à des organoïdes bourgeonnants contenant le gène transduit, qui peuvent être utilisés pour des analyses fonctionnelles supplémentaires.
Transférez les organoïdes dans cette dernière petite quantité de milieu dans un puits d'une plaque 48 puits.
Ajouter le lentivirus à haut titre préparé
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