Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:40 min • August 31st, 2026
Prélevez des cultures de cellules cancéreuses du sein.
Co-infecter avec deux types d'adénovirus. L'un porte un gène de la protéine fluorescente verte ou GFP sous un promoteur activement constitutif.
L'autre contient un gène rapporteur codant pour la protéine fluorescente rouge ou RFP, sous un promoteur sensible aux SMAD.
Ajouter le TGF-bêta à la culture témoin et incuber.
Les virus se lient au récepteur pour pénétrer dans la cellule hôte, délivrent les gènes dans le noyau et permettent l'expression de la GFP.
Dans les cellules témoins, le TGF-bêta se lie à son récepteur et active la voie SMAD en phosphorylant les protéines SMAD2 et SMAD3.
Ces protéines forment un complexe avec SMAD4.
Ce complexe se lie au promoteur du gène rapporteur, permettant l'expression de la protéine fluorescente rouge (RFP) en plus de celle de la protéine fluorescente verte (GFP).
Dans le témoin, la voie de signalisation SMAD reste inactive, permettant aux cellules d'exprimer uniquement la GFP.
Capturer des images fluorescentes de cellules vivantes.
La présence des deux signaux confirme l'activation de la voie SMAD par transduction double à l'aide d'adénovirus.
Le jour de l'infection par l'adénovirus, ensemencer les pu
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques