Imagerie par fluorescence multiplexée des acides nucléiques et des protéines virales dans des lymphocytes humains infectés

Commencer avec des lymphocytes humains infectés par le VIH-1 sur une lame couvre-objet fixée sur une lame porte-objet.

Ces cellules ont été hybridées avec des sondes qui marquent de manière fluorescente l'ARN viral et l'ADN proviral.

Incuber les cellules dans une solution de blocage pour éviter la liaison non spécifique des anticorps.

Introduire les anticorps primaires ciblant la protéine de capside du VIH-1.

Incuber pour permettre aux anticorps primaires de se lier à la protéine de capsides.

Laver les cellules avec du tampon pour éliminer les anticorps non liés.

Ajouter des anticorps secondaires marqués avec un fluorochrome qui se lient aux anticorps primaires.

Laver les anticorps non liés.

Ajouter un colorant spécifique de l'ADN pour colorer les noyaux des cellules, puis rincer pour éliminer l'excès de colorant.

Utilisez une imagerie de fluorescence multiplexée pour détecter simultanément l'ADN viral, l'ARN, les protéines et les noyaux de l'hôte en couleurs distinctes.

Cette visualisation au niveau de la cellule unique permet l'étude des différents stades du cycle de vie viral grâce à la visualisation simultanée de l'ADN viral, de l'ARN viral et des protéines virales dans les cellules infe