Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:36 min • August 31st, 2026
Commencez avec une suspension contenant des précipités d'intégrasomes du virus foamy prototype ou PFV, d'intégrases monomériques, d'oligomères d'ADN et d'agrégats protéiques.
Les intasomes de PFV sont des tétramères d'intégrases virales associés à des oligomères synthétiques qui imitent l'ADN génomique viral.
Ajouter une solution saline à la suspension et incuber sur de la glace. Le sel réduit les interactions électrostatiques entre les intasomes, permettant ainsi la solubilisation des précipités.
Pipeter doucement à intervalles réguliers pour favoriser la solubilisation de l'intasome.
Centrifuger pour former un culot du précipité restant et recueillir le surnageant contenant les intasomes solubles.
Prenez une colonne de chromatographie d'exclusion stérique pré-équilibrée, remplie de billes d'agarose réticulée, et chargez le surnageant sur la colonne.
En raison de leur grande taille, les agrégats protéiques et les intasomes contournent les pores des billes et éluent plus tôt.
Les intégrases monomériques plus petites et les oligomères pénètrent dans les pores des billes et éluent plus tard.
Recueillir les fractions éluées en début d'élution contenant les intasomes pour des analyses en aval
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