Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:52 min • August 31st, 2026
Commencez avec une culture de cellules humaines de cancer du foie transfectées par l'ARN du virus de l'hépatite E (HEV) afin de produire des particules virales.
Certaines VHE acquièrent une membrane endosomale d'origine cellulaire et quittent la cellule, tandis que d'autres restent à l'intérieur de la cellule sous forme de VHE non enveloppées.
Pour récolter les VHE extracellulaires, recueillir et filtrer le surnageant de culture afin d'éliminer les débris cellulaires.
Conserver à une température ultra-basse pour préserver l'infectiosité.
Pour récolter les VHE intracellulaires, lavez les cellules avec un tampon.
Ajouter de la trypsine-EDTA pour détacher les cellules, puis ajouter un milieu pour arrêter l'activité enzymatique.
Transférez la suspension dans un tube et centrifugez.
Jetez le surnageant contenant la trypsine résiduelle. Resuspendez le culot et transférez-le dans un tube.
Congelez les cellules dans de l'azote liquide et décongelez-les sur de la glace.
Répétez les cycles de congélation-décongélation pour lyser les cellules et libérer les virus.
Centrifuger, recueillir le surnageant contenant les virus et stocker à une température ultra-basse.
Le sixième jour, filtrer le surnageant à
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