Reprogrammation de cellules sanguines humaines en cellules souches pluripotentes induites médiée par le virus Sendai

Prélevez une culture de cellules mononucléées du sang périphérique humain (PBMC).

Ajouter le virus Sendai codant pour les facteurs de transcription de reprogrammation. Couvrir et sceller la plaque.

Centrifuger pour améliorer le contact virus-cellule et incuber.

Après la fusion du virus, l'ARN viral exprime des facteurs de transcription qui activent les gènes de pluripotence cellulaire et répriment les gènes spécifiques à la lignée afin d'initier le reprogrammation.

Pendant cette étape, un sous-ensemble de PBMC transduits se transforme en cellules souches pluripotentes induites (iPSC) et exprime des protéines d'adhérence.

Transférez-les dans un puits revêtu de matrice et centrifugez les cellules. Remplacez le surnageant par un milieu de croissance.

Après incubation, les iPSC adhèrent à la matrice, tandis que les PBMC transduits non adhérents restent en suspension.

Transférez la suspension dans un puits revêtu et centrifugez. Ajoutez le milieu dans le puits d'origine et incubez les deux.

Les PBMC transduits restants entament la reprogrammation, se transforment en iPSC et adhèrent. Cette étape maximise la rétention des cellules reprogrammées.

Remplacer le milieu chaque jour pour maintenir la c