Analyse de l'internalisation du virus de la grippe à l'aide d'un essai de blocage à la streptavidine

Commencez avec des tubes contenant des cellules épithéliales pulmonaires humaines.

Ajoutez des virus de la grippe biotinylés et incubez sur de la glace. Les virus se lient à la surface des cellules sans être internalisés.

Centrifuger pour séparer les cellules liées au virus, retirer le surnageant et resuspendre.

Dans le tube du point temporel initial, ajoutez de la streptavidine non marquée, qui se lie aux virus biotinylés, formant des complexes.

Ajouter de la streptavidine marquée par un fluorophore, qui ne parvient pas à se lier au complexe virus streptavidine-biotine. Laver et fixer les cellules.

Incubez le tube du point temporel ultérieur à une température plus élevée, permettant ainsi l'internalisation du virus, puis remettez-le sur glace.

Ajouter de la streptavidine non marquée et un agent bloquant l'internalisation, qui empêche la capture virale ultérieure, puis incuber. La streptavidine se lie aux virus biotinylés fixés à la surface, puis laver.

Fixer les cellules et ajouter un tampon contenant un détergent pour les perméabiliser.

Lavez et ajoutez la streptavidine marquée par un fluorophore, qui pénètre dans les cellules et se lie à la biotine.

Analyser les échantillons par cytométr