Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:48 min • August 31st, 2026
Prenez une culture cellulaire de mammifères en phase stationnaire avec une réplication de l'ADN minimale et collectez le milieu conditionné.
Ajouter le virus de l'herpès simplex (HSV) et incuber avec agitation occasionnelle afin de permettre l'attachement viral. Laver pour éliminer le virus non lié et rétablir le milieu conditionné.
Après incubation, le virus fusionne avec la membrane de l'hôte, libérant le nucléocapside dans le cytoplasme.
L'ADN double brin viral pénètre dans le noyau, s'arrondit et exprime des protéines virales nécessaires à la réplication de l'ADN viral.
Les protéines virales et cellulaires déroulent l'ADN viral et synthétisent un brin d'ARN amorce. Ensuite, le complexe de polymérase ADN viral se fixe et allonge l'amorce pour la synthèse de l'ADN.
À mesure que la réplication progresse, ajouter un analogue de nucléoside au milieu de culture. Celui-ci pénètre dans les cellules et est converti en forme triphosphate.
Étant donné que la réplication de l'ADN de l'hôte est minimale, l'analogue est incorporé de préférence dans l'ADN viral en cours de réplication, marquant ainsi les génomes viraux.
Les génomes viraux marqués sont prêts pour une analyse protéomique en aval des p
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