Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 5:13 min • August 31st, 2026
Prenez les noyaux cellulaires contenant les génomes viraux, marqués avec des nucléotides modifiés par un alcyne.
Suspendre les noyaux dans un mélange d'azoture de biotine et d'ions cuivre, puis incuber.
L'ion cuivre favorise la liaison covalente entre l'azoture et le groupe alcyne.
Centrifuger et jeter le surnageant.
Resuspendre dans le tampon, transférer et centrifuger pour former un culot.
Congelez rapidement, puis décongelez le culot pour faciliter la lyse.
Resuspendre et soniquer pour lyser les noyaux.
Centrifuger et recueillir le surnageant contenant les complexes protéine-ADN viral.
Filtrez le surnageant pour éliminer les contaminants.
Étendre le filtrat.
Ajouter des billes magnétiques revêtues de streptavidine et incuber pour favoriser la liaison avec les complexes protéine-ADN biotinylés.
Appliquez un champ magnétique pour récupérer les billes et lavez-les pour éliminer les contaminants.
Répétez le lavage.
Ajouter un tampon d'élution et chauffer pour séparer et dénaturer les protéines.
Séparez les billes, récupérez l'éluat.
Congelez rapidement les protéines isolées. Conservez-les à des températures ultra-basses pour des analyses ultérieures.
Après avoir complètement éliminé le PBS, re-susp
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques