Isolement de virus endogènes à partir de Drosophila sauvages à l'aide de lignées cellulaires perméables modifiées

Commencez avec un tube contenant des adultes Drosophila anesthésiés du même sexe et de la même espèce.

Ajoutez un tampon et homogénéisez pour libérer les populations virales endogènes et les bactéries.

Centrifuger l'homogénéat, puis faire passer le surnageant à travers une membrane par centrifugation afin d'éliminer les bactéries et les débris.

Transférez le filtrat dans une plaque multipuits contenant des cultures cellulaires de Drosophila modifiées et permissives aux virus à ARN, puis incubez.

Les virus pénètrent dans la cellule hôte via endocytose médiée par les récepteurs

Une fois à l'intérieur, le génome viral se réplique, produisant de l'ARN double brin (ARNdb) intermédiaires.

Les cellules hôtes expriment une protéine suppresseur qui se lie à l'ARNdb, empêchant sa dégradation par la Dicer, l'enzyme de défense de l'hôte.

Ceci permet la synthèse de l'ARN viral et la production de protéines virales, favorisant la réplication et l'amplification virales.

De fortes charges virales nuisent à la croissance des cellules hôtes et provoquent des effets cytopathogènes.

Centrifuger brièvement la plaque.

Recueillir le surnageant contenant les populations virales et le conserver à une température bas