Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:08 min • August 31st, 2026
Commencez avec un système de bioréacteur contenant un support de foie de rat décellularisé repeuplé de cellules hépatiques humaines.
Le squelette est maintenu dans un système d'écoulement qui circule le milieu afin d'assurer l'apport de nutriments.
Charger une seringue avec un tampon contenant un vecteur viral adéno-associé recombinant.
Le vecteur transporte de l'ADN auto-complémentaire avec une cassette de transgène codant pour un rapporteur fluorescent et un ARN d'interférence génique.
Arrêtez l'écoulement du milieu et déconnectez le tube d'entrée.
Injecter le vecteur par le vaisseau sanguin principal qui alimente la charpente.
Incuber pour permettre l'interaction entre le vecteur et les cellules.
Le vecteur pénètre dans les cellules hépatiques par endocytose médiée par récepteur.
Une fois à l'intérieur, le vecteur échappe à l'endosome et libère son ADN auto-complémentaire dans le noyau.
L'ADN auto-complémentaire permet une expression directe du transgène, produisant une protéine fluorescente et un ARN d'interférence génique.
Reprendre progressivement le débit du milieu pour rétablir la circulation à travers le support.
Le modèle de foie transduit est désormais adapté à une analyse en aval.
Transduisez maintenant le modèle de foie. Commencez par préparer 27 billions de vecteurs dans cinq millilitres de PBS chargés dans une seringue. Du rouge de phénol peut être ajouté à 5 microgrammes par millilitre.
Ensuite, déconnectez le foie du circuit de milieu et injectez les vecteurs dans le système. Une fois injectés, incubez le système pendant une heure sans pompage. Augmentez ensuite progressivement le débit comme décrit précédemment.
Plus tard, pendant l'incubation du foie transduit sur six jours, remplacez 50 millilitres du milieu tous les deux jours.