Confirmation de la transduction virale dans le foie de rat recellularisé par marquage immunohistochimique

Commencez avec un tissu hépatique de rat recellulaire congelé, contenant des hépatocytes humains, inclus dans du milieu cryogénique.

Dans ce tissu, les hépatocytes transduits expriment la protéine fluorescente verte émeraude (EmGFP), une protéine rapporteuse codée par le vecteur viral.

Utilisez un cryotome pour couper des sections minces qui conservent l'architecture cellulaire et tissulaire. Transférez les sections sur une lame.

Traitez les sections avec un détergent doux afin de perméabiliser la membrane cellulaire.

Appliquer un anticorps primaire anti-EmGFP qui se lie spécifiquement à la protéine rapporteur fluorescente exprimée dans les cellules transduites.

Laver pour éliminer les anticorps non liés.

Introduisez un anticorps secondaire conjugué à un fluorophore rouge, qui se lie à l'anticorps primaire, puis effectuez un lavage.

Ajouter un colorant fluorescent bleu spécifique de l'ADN qui se lie à l'ADN cellulaire.

Sous un microscope à fluorescence, la colocalisation de la fluorescence rouge avec les noyaux colorés en bleu confirme que les hépatocytes transduits dans le tissu hépatique expriment avec succès la protéine rapporteur virale.

À l’aide d’un scalpel, prélevez des échantillons