Croissance virale dans des cellules épithéliales nasales humaines cultivées à l'interface air-liquide

Commencez avec des cellules épithéliales nasales humaines recouvertes de mucus, cultivées sur un insert transwell dans une plaque multi-puits.

Le côté basal de la culture est en contact avec le milieu tandis que la surface apicale est exposée à l'air, ce qui simule l'interface air-liquide de la cavité nasale.

Lavez la culture avec un tampon pour éliminer la couche de mucus.

Ajouter le coronavirus, suspendu dans un milieu sans sérum, à la culture.

Incuber la plaque avec un léger balancement occasionnel pour assurer l'adsorption virale.

Retirez l'inoculum viral et lavez avec un tampon pour éliminer les virus non liés.

Retirer l'insertion et reconstituer le puits avec du milieu frais.

Incuber la plaque pour permettre l'infection virale.

Le coronavirus se lie au récepteur de surface cellulaire, pénètre par endocytose et libère son génome dans le cytoplasme.

Le génome viral se réplique et produit des protéines, qui s'assemblent en de nouveaux virus.

De nouveaux virus sont libérés de manière apicale, se propagent pour infecter les cellules voisines et amplifient la croissance virale.

Faites croître et différencier les cultures à interface air-liquide nasales, ou cultures ALI, dans des inserts trans