Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:33 min • August 31st, 2026
Prenez une culture cellulaire humaine.
Ajouter des lentivirus codant pour un ARNip ciblant de manière conditionnelle l'ARNm de l'hôte sous un promoteur sensible à la tétracycline fusionné à un opérateur.
Le lentivirus porte également des gènes codant pour un répresseur de la tétracycline et une protéine de résistance aux antibiotiques, placés sous un promoteur constitutif.
Incuber pour permettre la livraison de l'ARN viral dans les cellules hôtes.
L'ARN se convertit en ADNc et s'intègre dans le génome de l'hôte.
Lavez, ajoutez le milieu et incubez pour permettre l'expression du répresseur de la tétracycline et de la protéine de résistance à l'antibiotique, générant ainsi des cellules transduites. Le répresseur de la tétracycline se lie à l'opérateur et supprime l'expression de l'ARNi en épingle à cheveux (shRNA).
Lavez, ajoutez le milieu supplémenté en antibiotique et incubez.
Les cellules transduites expriment la protéine de résistance à l'antibiotique, ce qui permet leur survie sélective en présence de l'antibiotique.
Ajouter de la doxycycline, un analogue de la tétracycline, dans la culture.
La doxycycline se lie au répresseur de la tétracycline, empêchant sa liaison à l'opérateur et per
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