Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:51 min • August 31st, 2026
Prendre des vecteurs lentiviraux contenant l'antigène HIV-1 p24, une protéine marqueur utilisée pour la détection.
Ajouter un détergent pour lyser et libérer la p24, puis diluer l'échantillon par dilutions sérielles.
Prenez une microplaque revêtue d'anticorps monoclonaux anti-p24 et d'un agent bloquant pour prévenir la liaison non spécifique.
Ajouter les dilutions d'échantillons et les étalons p24 comme références.
Incuber pour permettre l'interaction de la p24 avec les anticorps via un épitope spécifique, puis éliminer les composants non liés.
Incuber avec des anticorps polyclonaux anti-p24 qui se lient à différents épitopes sur la protéine p24. Éliminer tous les anticorps non liés.
Ajouter des anticorps marqués par la peroxydase qui se lient aux anticorps polyclonaux. Éliminer les anticorps non liés.
Ajouter un substrat de peroxydase qui se transforme en un produit coloré.
Ajouter un acide pour inactiver la peroxydase et stabiliser le produit.
Mesurer l'absorbance correspondant à l'intensité de la couleur, qui est proportionnelle à la concentration de p24.
Générez le graphique standard et estimez les concentrations des échantillons afin de déterminer le titre viral.
Recouvrir une plaque 96
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