Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:44 min • August 31st, 2026
Commencez par un mélange de plasmides en suspension dans un milieu nutritif.
Le premier plasmide porte un génome viral adéno-associé recombinant (AAV) qui code pour le gène d'intérêt.
Le deuxième plasmide code pour les protéines Rep et Cap.
Le troisième plasmide code pour des protéines auxiliaires.
Ajouter un agent de transfection à la solution de plasmide. Bien mélanger et incuber.
L'agent de transfection chargé positivement se lie à l'ADN plasmidique chargé négativement, formant des complexes.
Introduire les complexes dans une monocouche de cellules de mammifères. Incuber.
Les complexes pénètrent dans les cellules par endocytose.
À l'intérieur des cellules, les gènes codés par les plasmides induisent l'expression des protéines virales.
La protéine Rep réplique le génome viral, tandis que les protéines Cap forment les capsides.
La protéine Rep, conjointement avec les protéines auxiliaires, emballe le génome viral répliqué dans des capsides, formant ainsi des particules AAV complètes.
Les vecteurs AAV recombinants portant le gène d'intérêt sont prêts pour des applications de transfert de gènes.
Après avoir généré les constructions rAAV9 et cultivé les cellules HEK293 selon le protocole décrit,
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