Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 5:56 min • August 31st, 2026
Commencez avec un lysat cellulaire contenant de l'ADN cellulaire agrégé avec des protéines cellulaires et des particules virales.
Ajouter des ions magnésium, suivis d'une nucléase, afin d'activer la dégradation enzymatique de l'ADN cellulaire et de rompre les agrégats ADN–protéine.
Centrifuger pour séparer les débris et recueillir le surnageant contenant les particules virales.
Superposer le surnageant sur un gradient discontinu d'iodixanol dont les concentrations augmentent du haut vers le bas, puis remplir le tube avec du tampon.
Effectuer une ultracentrifugation pour séparer les composants selon leur densité. Les particules virales s'accumulent à l'interface entre les couches de forte et de moyenne densité.
Insérez une aiguille à cette interface et recueillez les particules virales dans un tube.
Ajouter un tampon contenant des composants stabilisants, qui empêche l'agglutination des particules virales.
Transférez ensuite la solution dans un tube muni d'un filtre à membrane.
Centrifuger pour concentrer les particules virales au-dessus du filtre.
Ajouter le tampon enrichi de l'agent stabilisant et centrifuger à nouveau afin d'obtenir les particules virales purifiées.
Pour récolter les cellu
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