Immortalisation de cellules endothéliales par transduction rétrovirale d'oncogènes viraux

Prenez un milieu contenant des particules rétrovirales codant pour des oncogènes viraux et un gène de résistance à un antibiotique.

Centrifuger le milieu pour éliminer les débris cellulaires.

Recueillir le surnageant contenant les particules virales et l'ajouter en surcouche sur une culture de cellules endothéliales.

Incuber pour permettre l'entrée virale.

L'ARN viral est transcrit en ADN par transcription inverse, lequel s'intègre dans le génome de l'hôte.

Le gène de résistance aux antibiotiques produit une protéine de résistance. Les oncogènes produisent des protéines qui se lient aux protéines suppresseurs de tumeur contrôlant la division cellulaire et les inactivent, prolongeant ainsi la durée de vie cellulaire.

Remplacer le milieu par un milieu frais.

Incuber à nouveau pour assurer une intégration stable de l'ADN viral.

Retirer le milieu et laver les cellules.

Ajouter une solution de dissociation enzymatique pour détacher les cellules.

Transférez la suspension cellulaire, centrifugez et éliminez le surnageant.

Resuspendre le culot et le transférer dans un flacon.

Ajouter un antibiotique au milieu.

Seules les cellules exprimant la protéine de résistance à l'antibiotique survivent, permettan