Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:52 min • September 30th, 2026
Commencez avec une culture bactérienne portant un génome de prophage intégré réprimé par une protéine répresseur de bactériophage, maintenant une phase lysogène dormante.
Ajouter un inducteur et incuber sous agitation pour déclencher le stress cellulaire.
Le stress cellulaire induit la clivage autocatalytique de la protéine répresseur, permettant au prophage de passer de la lysogénie à la réplication lytique.
L'ADN du prophage s'excise du génome bactérien et transcrit séquentiellement les gènes régulateurs précoces, les gènes de réplication de l'ADN intermédiaires, ainsi que les gènes structuraux et de lyse tardifs.
Transférer la culture dans un grand volume de milieu afin de diluer l'inducteur et incuber pour permettre la récupération cellulaire.
À des intervalles définis, ajouter une solution d’arrêt pour bloquer la transcription et préserver le profil d’ARN dans les cellules bactériennes.
Centrifuger la culture et jeter le surnageant. Resuspendre les cellules, transférer le surnageant dans un petit tube, puis centrifuger.
Éliminer le surnageant et congeler rapidement le culot pour préserver l'intégrité de l'ARN.
Enfin, ajoutez un réactif d'extraction d'ARN et homogénéisez pour rompre le
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