Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
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Commencez avec une chambre cellulaire multicouche contenant des cellules de mammifères transfectées produisant des vecteurs viraux d'adéno-associés. La chambre cellulaire permet d'obtenir un rendement élevé de récolte virale.
Agiter vigoureusement la chambre pour détacher les cellules adhérentes, libérant ainsi les cellules contenant le virus et les particules virales extracellulaires dans le milieu.
Transférez le contenu dans un tube et centrifugez pour former un culot avec les cellules contenant le virus.
Recueillir le surnageant contenant le virus extracellulaire et le transférer dans un flacon de stockage.
Resuspendre le culot dans le tampon de lyse et incuber.
Les enzymes et les détergents présents dans le tampon lysent les cellules et libèrent les virus intracellulaires intacts dans la solution.
Centrifuger le lysat pour faire précipiter les débris cellulaires. Récupérer le surnageant contenant le virus et l'ajouter au même flacon de stockage contenant le virus extracellulaire.
Conserver la suspension virale brute à basse température jusqu'à la purification ultérieure.
Après l'incubation, agiter vigoureusement la chambre de culture cellulaire pour détacher les cellules jusqu'à ce que
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