Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:35 min • August 31st, 2026
Commencez avec un lysat cellulaire filtré contenant des vecteurs viraux adéno-associés (AAV) et des contaminants d'origine hôte.
Faites passer le lysat à travers une colonne d'affinité à base d'héparine.
Les protéines de l'capside virale se lient électrostatiquement aux groupes d'héparine chargés négativement.
Rincez la colonne avec un tampon pour éliminer les contaminants non liés.
Appliquer un tampon contenant un détergent pour solubiliser les débris membranaires.
Rincer à nouveau avec le tampon sans détergent.
Introduire un tampon supplémenté en cations afin de créer un environnement ionique, puis laver avec un tampon de force ionique modérée pour éliminer les impuretés faiblement liées.
Ajouter un tampon à haute force ionique pour rompre les interactions entre l'capside et l'héparine et éluer les particules virales.
Recueillir les fractions d'élution enrichies en particules virales intactes et les transférer dans des tubes de concentration centrifuge équipés de membranes filtrantes.
Faire centrifuger les tubes pour éliminer le tampon en excès, puis recueillir les fractions virales concentrées dans un tube.
Rincez la membrane avec le tampon pour récupérer les particules virales résiduelle
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