Transduction d'embryons fertilisés de rat via des vecteurs lentiviraux
Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:07 min • August 31st, 2026
Prenez une boîte de microinjection contenant une goutte de milieu de culture d'embryons au centre, recouverte d'huile minérale pour éviter l'évaporation.
Placer la boîte sous un microscope inversé.
Placer une capillaire de microinjection et une pipette de maintien sur un dispositif de micromanipulateur sous le microscope.
La capillaire de microinjection est chargée avec une suspension de vecteurs lentiviraux portant le transgène.
Ensuite, transférez les embryons de rat fécondés dans le milieu.
Fixer un embryon à l'aide de la pipette de maintien en appliquant une aspiration.
Avec un grossissement plus élevé, insérez la micropipette d'injection à travers l'enveloppe extracellulaire glycoprotéique de l'embryon, la zone pellucide, et injectez la suspension lentivirale dans l'espace périvitellin.
Ensuite, transférez les embryons injectés dans une boîte de culture et incubez-les.
Le virus pénètre dans l'embryon et libère son génome contenant le transgène dans le cytoplasme.
Ultérieurement, il est reverse transcrit en ADN et s'intègre dans le génome de l'embryon, incorporant le transgène.
Les embryons transduits sont désormais prêts à être traités.
Pour la microinjection de vecteurs lentiviraux sous
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